Система экспрессии PET ™ дает высочайшее содержание белка в E. coli . Во время экспрессии ваш белок, представляющий интерес, может достигать уровней, превышающих 50 процентов общего клеточного белка. На основе векторов экспрессии T7, первоначально разработанных Studier и его коллегами (1-3), высокоуровневая экспрессия достигается за счет того, что РНК-полимераза T7 является более процессуальной, чем нативная РНК-полимераза E. coli, и посвящена транскрипции вашего интересующего гена. Производство белков дополнительно усиливается в системе штаммом экспрессии BL21 Star ™ E. coli , что значительно улучшает стабильность транскриптов мРНК и увеличивает экспрессию белка в десять раз._x000D_ _x000D_ Упрощенное, эффективное Направленное клонирование TOPO® позволяет быстро вводить вектор экспрессии Champion ™ pET. Эти наборы характеризуются линеаризованными, экспрессируемыми топоизомеразой I-активными экспрессионными векторами Champion ™ pET для пятиминутного направленного клонирования. Направленная технология клонирования TOPO® облегчает экспрессию генов, поскольку: _x000D_ _x000D_ • Корректирующий фермент используется для ПЦР, что приводит к меньшему количеству ошибок в клонированных генах. _x000D_ • Более 90% клонов находятся в правильной ориентации для экспрессии генов, уменьшая время, затрачиваемое на скрининг колонии _x000D_ _x000D_ Доступны экспрессирующие векторы TOPO® Seven Champion ™ с ПЭТ: каждый вектор несет T7 lacпромотор для выражения высокого уровня. Доступны гибкие варианты упрощения определения белка, расщепляющих меток очистки, выбора клонов, несущих плазмиду, и / или улучшения выхода белка. _x000D_ С помощью векторных векторов TOPP® Champion ™ PET вы можете рассчитывать на продукцию самого высокого уровня белка. На фиг. 2 показана экспрессия гена lac Z в векторах POT направленного TOPO® Champion ™. На рисунке 3 показано эффективное расщепление с использованием протеазы TEV N-концевой метки слитого белка β-галактозидазы, экспрессированного из pET151 / D-TOPO®._x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Выражение:_x000D_ _x000D_ _x000D_ E. coli_x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Промоутер:_x000D_ _x000D_ _x000D_ T7 и lacO_x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Бактериальный или дрожжевой штамм:_x000D_ _x000D_ _x000D_ BL21 Star ™ (DE3)_x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Антибиотикорезистентность (бактериальная):_x000D_ _x000D_ _x000D_ Ампициллин (AmpR)_x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Расщепление:_x000D_ _x000D_ _x000D_ Участок распознавания EK (Enterokinase)_x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Метод клонирования:_x000D_ _x000D_ _x000D_ Направленный TOPO®_x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Учредительная или индуцируемая система:_x000D_ _x000D_ _x000D_ Индуцибильные_x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Механизм выражения:_x000D_ _x000D_ _x000D_ Выражение на основе клеток_x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Вызывающий агент:_x000D_ _x000D_ _x000D_ IPTG_x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Линия продуктов:_x000D_ _x000D_ _x000D_ BL21 Star ™, Champion ™, One Shot®, TOPO®_x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Размер товара:_x000D_ _x000D_ _x000D_ 20 реакций_x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Протеиновый тег или синтез:_x000D_ _x000D_ _x000D_ Его тег (6x), Xpress Epitope Tag_x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Агент выделения (эукариотический):_x000D_ _x000D_ _x000D_ Никто_x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Тип вектора:_x000D_ _x000D_ _x000D_ рЕТ_x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Каждый пакет Champion ™ pET направленного TOPO® представляет собой полную систему экспрессии. Направленная коробка для выражения TOPO® содержит 200 нг линеаризованного, топоизомераза I-активированного вектора PAMP ™ Champion ™; стерильная вода; дНТФ; 10X PCR-буфер; раствор соли; контрольный шаблон и праймеры; праймеры для секвенирования или скрининга ПЦР; и контроль экспрессии. Хранить при -20 ° C. Коробка One Shot® TOP10 содержит двадцать одну 50 мкл аликвоты химически компетентной среды E. coli , SOC и контрольную плазмиду. Хранить при -80 ° C. Коробка One Shot® BL21 Star ™ (DE3) содержит двадцать одну 50 мкл аликвоты химически компетентной E. coli, Среду SOC и контрольную плазмиду. Хранить при -80 ° C. Наборы с технологией Lumio ™ включают 20 мкл Lumio ™ Detection Reagent. Хранить при -20 ° C. Гарантированная стабильность в течение 6 месяцев при правильном хранении.