ДНК-полимераза Phusion U Hot Start – новая термостабильная ДНК-полимераза, полученная генно-инженерным путём. Благодаря внесению модификации в дНТФ-связывающий карман полимеразы Phusion было снято ограничение, характерное для высокоточных полимераз – неспособность встраивать дезоксиурацилтрифосфат. Phusion U способна как встраивать урациловый остаток, так и считывать его в ДНК-матрице. Помимо этого, Phusion U обладает всеми характеристиками ДНК-полимераз Phusion – точностью, скоростью, способностью синтезировать длинные последовательности (до 20 тыс. п.н.). Частота ошибок у полимеразы Phusion U в 25 раз ниже, чем у стандартной Taq ДНК-полимеразы. Встроенная функция горячего старта реализуется благодаря комбинации фермента со специфическим лигандом Affibody, ингибирующим полимеразную и 3’→5’ экзонуклеазную активности при комнатной температуре. Эти особенности делают ДНК-полимеразу Phusion U оптимальным ферментом для амплификации повреждённой ДНК, ДНК после бисульфитной конверсии, а также для постановки ПЦР со сниженным риском контаминации. Наборы Phusion U Green Hot Start комплектуются 5-кратными буферами Phusion Green, содержащими утяжеляющий агент и два маркерных красителя. Это позволяет наносить продукты ПЦР на гель без добавления дополнительных реактивов для электрофореза. Утяжеляющий агент и маркерные красители инертны, не влияют на ПЦР и не мешают использованию ПЦР-продуктов в реакциях лигирования или рестрикции, а также при секвенировании. ДНК-полимераза Phusion U Hot Start синтезирует ПЦР-продукты с тупыми концами. Условия хранения - 20 °С. Особенности наборов Phusion U Green Hot Start: высокая точность синтеза (в 25 раз выше по сравнению с Taq); способность встраивать в ДНК дУТФ и использовать урацил-содержащие последовательности ДНК в качестве матрицы; отсутствие неспецифического синтеза и деградации праймеров в процессе подготовки ПЦР; высокая скорость синтеза – 1 тыс. п.н. за 15-30 секунд; возможность нанесения ПЦР-продуктов на гель непосредственно после амплификации без добавления реагентов для электрофореза. Области применения: амплификация ДНК после бисульфитной конверсии; амплификация повреждённой или деградированной ДНК; ПЦР с минимальным риском контаминации посторонними ПЦР-продуктами; методы клонирования на основе вырезания урациловых остатков ( USER). В состав набора входят: ДНК-полимераза Phusion U Hot Start (2 Ед/мкл); 5Х буфер Phusion Green HF*; 5Х буфер Phusion Green GC*; ДМСО. * в состав 5Х буферов Phusion уже входит 7,5 мМ MgCl₂.