Thermo Scientific Maxima H минус обратная транскриптаза (RT) была разработана путем эволюции M-MuLV RT in vitro. Фермент обладает РНК-зависимой и ДНК-зависимой полимеразной активностью, но не обладает активностью РНКазы Н из-за мутации в РНКазном H-домене M-MuLV RT. Спроектированный фермент обладает значительно улучшенной термостабильностью, в 50 раз большей технологичностью, устойчивостью и повышенной скоростью синтеза по сравнению с M-MuLV RT дикого типа._x000D_ _x000D_ Активность РНКазы Н позволяет ферменту вырабатывать очень длинные РНК-транскрипты до 20 т.п.н. Благодаря высокой термостабильности фермент сохраняет полную активность в течение всей реакции обратной транскрипции и генерирует высокие выходы кДНК. Температура реакции может быть увеличена до 65 ° C для эффективной транскрипции областей РНК с высокой вторичной структурой или для улучшения специфичности с использованием ген-специфических праймеров. Чрезвычайно высокая технологичность фермента Maxima H Minus приводит к повышенной устойчивости к обычным ингибиторам реакции, таким как гуанидин, формамид и этанол._x000D_ _x000D_ Основные характеристики_x000D_ _x000D_ Термостабильный - 90% активен после инкубации при 50 ° C в течение 60 минут в реакционной смеси._x000D_ Активен до 65 ° C_x000D_ Высокий выход полноразмерной кДНК до 20 кб_x000D_ Высокая чувствительность - воспроизводимый синтез кДНК из широкого диапазона исходных количеств суммарной РНК (от 1 мкг до 5 мкг)_x000D_ Эффективность - полный синтез кДНК через 1–0 минут_x000D_ Повышенная устойчивость к обычным ингибиторам реакции_x000D_ Включает модифицированные нуклеотиды_x000D_ _x000D_ Применение_x000D_ _x000D_ Первая кДНК цепи синтез для ОТ-ПЦР и ОТ-ПЦР в реальном времени._x000D_ Обратная транскрипция при повышенных температурах для уменьшения влияния вторичной структуры._x000D_ Синтез кДНК для клонирования и экспрессии._x000D_ Создание меченых зондов кДНК для микрочипов.